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一文讀懂酶聯免疫吸附實驗的概念及原理

發布日期: 2022-01-17
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   酶聯免疫吸附實驗是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應板)表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。該技術可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優點。
  
  一、基本概念
  1、免疫:籠統地概括起來,免疫就是人和動物機體防御、排除外來物質(異物)進人體內,同時識別和清除體內死亡、變性物質和平定體內叛亂分子突變細胞,以保護和穩定自身的防護機制。
  2、抗原:抗原是指那些能夠誘導機體的免疫系統發生免疫應答,產生抗體和致敏效應淋巴細胞,并在體內外與之特異性結合,發生免疫反應的物質。
  3、抗體:是能與相應的抗原專一性結合的蛋白質分子,和機體其他生物大分子一樣是細胞的產物,分泌到體液中或表現在細胞表面上。
  4、抗原、抗體反應:抗原和抗體在體外的反應亦稱血清學反應。這類反應可借助免疫學方法進行檢測。
  
  二、酶聯免疫吸附實驗基本原理:
 ?、倏乖蚩贵w能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學活性;
 ?、诳乖蚩贵w與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性;
 ?、勖笜丝贵w與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例。
  以雞敗血支原體(Mg)抗體檢測為例:試驗用Mg抗原包被96孔板。被檢樣品加入包被孔后的孵育階段,血清樣品中的特異性Mg抗體與包被的抗原反應形成復合物,經過洗滌,為結合的物質被洗掉,微孔加入酶標抗體,酶標抗體可以與吸附在包被孔內的雞抗體結合。反應后進行洗滌,為結合的酶標抗體被洗去。加入酶底物后的顏色反應與血清中的Mg抗體的數量直接相關。
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